当胃肠功能严重障碍时，肠外营养（PN）可通过胃肠道以外的途径即静脉途径提供机体所需营养物质，改善预后［1］。当患者必需的所有营养物质均从胃肠外途径供给时，称为全肠外营养（TPN）。维生素C是体内有效的还原剂，在保护和维持体内一些重要抗氧化物质处于还原状态中起着重要作用［2］。目前，临床根据需要，常将维生素C加入TPN液中，为不耐受肠内营养及伴有肠内营养禁忌的重症患者提供PN治疗［3］。维生素C不稳定，极易氧化，受光照、温度、时间、包装材料等多种因素影响，其降解速度由氧、光线、吸收和吸附及催化剂决定［4-5］。维生素A、维生素C等遇到空气会发生氧化反应，遇到紫外线会逐渐分解，而维生素是TPN液中不可缺少的组成部分，故临床使用TPN液如需加入维生素时，一定要避光输注［5-6］。本研究中考察了在相同光照及温度条件下，不同时间点、不同包装材料对TPN液中维生素C含量的影响，为TPN液的合理应用提供参考。现报道如下。
1 仪器、试药与材料
1.1 仪器
New Classic MS型分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度为万分之一）；TGL-16型高速离心机（山东百欧医疗科技有限公司）；ACQUITY H-Class型超高效液相色谱(UPLC)仪（美国Waters公司）；FE20型实验室pH计（梅特勒-托利多仪器＜上海＞有限公司）。
1.2 试药
脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液（商品名卡文，批号为10MD3889，规格为每袋1 440 mL），甘油磷酸钠注射液（商品名格利福斯，批号为80ME569，规格为每支10 mL∶2.16 g），均购自费森尤斯卡比华瑞制药有限公司；脂肪乳注射液（C14-24）［商品名英脱利匹特（20%），批号为80MF072，规格为每瓶250 mL，主要成分为注射用大豆油50 g，注射用卵磷脂3.0 g，注射用甘油5.5 g，适量氢氧化钠，注射用水］，复方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）（商品名乐凡命，批号为80MG050，规格为250 mL，主要成分为氨基酸21.25 g，氮3.5 g），均购自华瑞制药有限公司；10%葡萄糖注射液（华润双鹤药业股份有限公司，批号为C，规格为每瓶100 mL∶10 g/250 mL∶25 g）；浓氯化钠注射液（石家庄四药有限公司，批号为Y，规格为每瓶100 mL∶10 g）；氯化钾注射液（中国大冢制药有限公司，批号为8186K2，规格为每支10 mL∶1.0 g）；葡萄糖酸钙注射液（成都倍特药业有限公司，批号为，规格为每支10 mL∶0.1 g）；硫酸镁注射液（天津金耀集团湖北天药药业股份有限公司，批号为，规格为每支10 mL∶2.5 g）；维生素C注射液（上海禾丰制药有限公司，批号为，规格为每支5 mL∶1 g，含量＞98%）；维生素C对照品（中国食品药品检定研究院，批号为-，规格为100 mg，含量为100%）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
1.3 材料
三层共挤三腔输液袋（Biofine膜，费森尤斯卡比华瑞制药有限公司，批号为10MD3889）；一次性使用静脉营养输液袋［乙烯-醋酸乙烯酯共聚物（EVA）材质，江苏康进医疗器材有限公司，批号为］；一次性使用静脉营养输液袋［聚氯乙烯（PVC）材质，上海曹杨医药用品厂，批号为］。
2 方法与结果
2.1 处方
参照TPN液中葡萄糖、氨基酸、脂肪乳及其他成分比例制订基础处方（表1），并参考美国食品药物管理局（FDA）与2003年公布的成人PN多种维生素日需要量推荐建议为200 mg/d［5］，于TPN液中加入维生素C。
2.2 3种包装材料TPN液配置
在静脉药物配置中心，于水平层流台上，严格按无菌操作规程配置。分别将硫酸镁注射液、葡萄糖酸钙注射液、氯化钾注射液、浓氯化钠注射液及维生素C注射液加入葡萄糖注射液中，注入营养袋内，注入过程中轻轻摇动；将甘油磷酸钠注射液加入氨基酸注射液中，注入已配置好的营养袋内，注入过程中轻轻摇动；将脂肪乳注射液注入营养袋内，注入过程中不断摇动；注入完毕，营养袋排气封口。将配置好的TPN液分别注于EVA与PVC材质一次性使用静脉营养输液袋（以下简称EVA袋与PVC袋）中。将脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液正放于水平层流台上，卷起袋子施加压力，使葡萄糖与氨基酸两腔垂直封隔打开，2种液体混合均匀；继续卷动袋子，施加压力，使脂肪乳隔室的垂直封隔打开；将脂肪乳氨基酸（17）葡萄糖（11%）注射液上下颠倒3次，即混合完全。将配置完成的2种TPN液分别注于PVC袋（A组）、EVA袋（B组）与三层共挤膜营养袋（C组）中，置于室温（25℃）日常光照下（模拟正常临床使用情况）。
表1 全肠外营养液处方（mL）Tab.1 The prescriptions of TPN（mL）?
2.3 维生素C含量测定
2.3.1 色谱条件
色谱柱：Zorbax Eclipse XDB C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流动相：5 mmol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇（60∶40，V/V）；流速：0.7 mL/min；检测波长：266 nm；柱温：30℃；进样量：2μL。
2.3.2 溶液制备
取维生素C对照品20 mg，精密称定，置50 mL棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，得维生素C对照品贮备液；精密吸取1.50 mL维生素C对照品贮备液，置10 mL棕色容量瓶中，加流动相稀释并定容至刻度，即得对照品溶液。吸取维生素C注射液0.20 mL，按表1处方加入同比例缩小配置的样品溶液［即20%脂肪乳注射液（C14-24）17.70 mL，复方氨基酸注射液（18AA-Ⅱ）20.50 mL，10%葡萄糖注射液61.80 mL，甘油磷酸钠注射液0.48 mL，葡萄糖酸钙注射液0.15 mL，硫酸镁注射液0.13 mL，氯化钾注射液1.25 mL，浓氯化钠注射液1.04 mL］，吸取1.50 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加流动相稀释并定容至刻度，吸取适量转移至离心管中，12 000 r/min离心10 min，取上清液，0.22μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。按供试品溶液制备方法制备去除维生素C的阴性对照品溶液。
2.3.3 方法学考察
专属性试验：分别精密吸取2.3.2项下溶液，按2.3.1项下色谱条件进样分析，记录色谱图（图1）。结果阴性对照无干扰，表明方法专属性良好。
线性关系考察：分别精密吸取2.3.2项下维生素C对照品贮备液0.125，0.25，0.5，1.0，1.5，3.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，加流动相稀释并定容至刻度，得终浓度为5.0，10.0，20.0，40.0，60.0，80.0μg/mL的维生素C溶液，按2.3.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分色谱峰面积（Y）为纵坐标、对照品质量浓度（X，μg/mL）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程Y=1.282 210 4X+2.830 510 3，r=0.999 9(n=6）。结果维生素C质量浓度在5.0～80.0μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。
精密度试验：取2.3.2项下对照品溶液，按2.3.1项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果维生素C峰面积的RSD为1.75%（n=6），表明仪器精密度良好。
重复性试验：按2.3.2项下方法平行制备6份供试品溶液，按2.3.1项下色谱条件下进样测定。结果维生素C含量的平均值为58.9μg/mL，RSD为2.37%（n=6），表明方法重复性良好。
加样回收试验：取同一批（批号为）维生素C注射液，精密量取6份，每份50μL，置10 mL棕色容量瓶中，取维生素C对照品10 mg，精密称定，分别加入6份维生素C注射液中，加流动相稀释至刻度，准确稀释100倍，按2.3.1项下色谱条件进样测定，并计算含量和回收率。结果见表2。
图1 超高效液相色谱图 solution B.Test solution reference UPLC chromatograms
表2 维生素C加样回收试验结果（n=6）Tab.2 Recovery test of vitamin C（n=6）?
2.4 稳定性考察
外观考察：分别于制备后0，2，4，6，8，24 h时对2.2项下各组TPN液取样，肉眼观察溶液。结果3组TPN液颜色均无变化，无分层、沉淀、絮凝现象发生。
pH值测定：分别于制备后0，2，4，6，8，24 h时对2.2项下各组TPN液取样，平行3份，使用pH计测量pH值。结果见表3。3组各时间点组间比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；3组各时间点组内比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。
表3 TPN液pH值测定结果（±s，n=3）Tab.3 Determination results of pH value of TPN（±s，n=3）?
维生素C含量测定：分别于制备后0，2，4，6，8，24 h时吸取2.2项下各组TPN液2.0 mL，置10 mL容量瓶中，稀释至刻度，依法制备供试品溶液，按2.3.1项下色谱条件进样测定含量，计算不同时间各组溶液中维生素C的相对含量（以每组0 h含量计为100%，计算各时间点的相对百分含量）。结果见表4。可见，3组维生素C的含量均随时间的延长而逐渐减少，A组（PVC袋）TPN液中维生素C含量下降最明显，在室温下放置2 h时降至91%，6 h时降至71%，24 h时降至33%；B组（EVA袋）维生素C含量下降较缓慢，4 h时降至90%，6 h时降至86%，24 h时降至43%；C组（三层共挤膜营养袋）中维生素C含量变化最小，放置24 h时仅降至91%。
表4 TPN中维生素C相对百分含量测定结果（±s，%，n=3）Tab.4 Determination of relative percentage content of vitamin C in TPN（±s，%，n=3）?
3 讨论
TPN液经静脉途径为患者提供水、葡萄糖、氨基酸、脂肪乳、电解质、多种微量元素、维生素及某些药理营养素（如谷氨酰胺、ω-3脂肪酸等）或药物（如胰岛素），所有这些添加物和添加顺序、添加方式及包装材料均可能影响TPN液的稳定性和相容性［4，7-8］。在进行混合、储藏及输注过程中，制剂稳定性有所下降，若实际输注的营养成分含量不达标，或因成分不稳定而发生某些物理化学变化，会对患者身体造成损伤，甚至威胁生命。目前，影响TPN液稳定性的因素包括各营养成分的降解及脂肪乳的稳定性、TPN液的各项参数(如pH值、不溶性微粒等)，以及营养物质间的稳定性［9-10］。
TPN液成分复杂，影响维生素C含量的因素较多，本研究中以5 mmol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇（60∶40，V/V）为流动相，采用UPLC法短时间完成一次含量分析，相比2015年版《中国药典（二部）》中的碘量法和滴定法［11］，分离效果及分析效率均更优。通过方法学验证，本研究中所建立的含量测定方法合理准确、简便可行。
pH值是影响TPN液稳定性的重要因素。当pH＜5时，会使脂肪乳丧失稳定性；当pH值偏高时，维生素C和维生素B6等结构不稳定，易失效［12］，pH值控制在5.0～6.5时可保持TPN液的相对稳定［10］。本研究中，3组TPN液的pH值范围为5.～5.，变化不明显，介于稳定范围内，表明不同材质营养袋及维生素C的加入对TPN液的pH值影响较小。
配置TPN液需将多种注射液混合，调配过程中易残余部分溶液，使实际溶液体积与理论不符，故将各组0 h时维生素C含量记为100%，计算不同时间点的相对百分含量，以减小误差。不适宜的营养袋材质可能引起TPN液中各活性成分的迁移、附着、吸附，甚至发生化学反应，影响其疗效［4］。结果表明，所有材质营养袋中维生素C在24 h内含量均呈下降趋势。其中，PVC材质营养袋对维生素C含量变化影响最显著，可能是由于PVC材料较强的吸附性及较差的密封性，导致维生素C的吸附与氧化。EVA材质营养袋中维生素C放置4 h时下降10%，可能与EVA相较于三层共挤膜氧气更易渗透进入，加速维生素C的氧化有关。三层共挤膜营养袋放置24 h后维生素C含量变化最小，说明相较于其他2种材质，其更适合用于含维生素C的TPN液的保存。由于本试验未对高、中、低不同浓度维生素C的稳定性进行考察，维生素C的浓度对自身稳定性是否有影响仍有待进一步研究。
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文章来源：聚氯乙烯 网址: http://julvyixi.400nongye.com/lunwen/itemid-46845.shtml
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